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Protein sequencing 분석에 적합한 PVDF membrane 선택 가이드

Edman sequencing 분석에 적합한 PVDF membrane 제품군과 구별 방법에 대한 가이드를 드리고자 합니다.

1. 요지

Edman sequencing (edman degradation method) 분석법은 반응 특성 상 반응 중 단백질의 고정화를 위한 membrane 이 필요하며 이때는 dot-blot 방법이나 electro-blot 방법을 이용하여 적절한 양의 단백질을 고정화를 시킨 membrane 을 시퀀서 장비에 주입하여 분석을 진행해야 합니다. 최근 다양한 분석하는 목적에 따라 각 목적에 맞게 효율성을 증대 시킨 PVDF membrane 제품군이 출시되고 있는 추세를 감안할 때, sequencing analysis 목적과 immune-blot analysis 목적으로 구별하여 PVDF 제품을 선택적으로 사용해야하는 흐름에 분석 고객분들에게 가이드를 드리고자 PVDF membrane 에 대한 선택 가이드를 정리하여 공지합니다.

 

2. Protein sequencing 이 가능한 PVDF 제품군 (추천군)

2.1. Sequi-Blot™ PVDF Membrane / Biorad

2.2. Hybond SEQ / amersham biosciences

2.3. Immobilon-PSQ Membrane / Merck Millipore

 

3. 그 외 PVDF 제품군 중 protein sequencing 이 가능한 PVDF membrane 확인 방법

Protein sequencing에 적합한 PVDF membrane의 경우 blotting을 수행하기 전 100% MeOH1분이내의 시간으로 soaking (activation)을 시키는 전 처리 과정에 해당하는 PVDF membrane의 경우가 protein sequencing에 적합한 membrane입니다.

Membrane pore size 는 분석하고자 하는 단백질의 극단적인 분자량 범위 (>100kDa, <5kDa)이상의 단백질을 제외하고는 0.45, 0.2um 에 대한 필수적인 선택 사항에 해당합니다.

 

4. Dry blot 방식의 전용 PVDF membrane 은 사용을 피할 것

Dry-blot 전용 소모품에 함께 구매하는 PVDF 인 경우 nitrocellulose 가 혼입된 재질을 사용하는 특성상 sequencer 반응에 사용되는 시약 및 용매에 높은 화학적 반응성을 나타냅니다. 따라서 dry-blot kitPVDF membrane 은 앞서 언급한 제품군의 PVDF100% MeOHsoaking 이후 동일한 과정으로 사용하시면 되겠습니다.

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