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[BT] Protein Sequencing 에 최적의 PVDF membrane 을 위한 가이드

A. protein sequencing 에 최적화된 제품군
 
BioRad : Sequi-Blot PVDF membrane 제품군
Milipore : Immobilon-Psq Transfer Membrane 제품군
Milipore : Immobilon-P Transfer Membrane 제품군
Invitrogen : Invitrolon™ PVDF 제품군
Pall Co. : BioTrace™ PVDF Transfer Membrane
Amersham : Hybond PVDF Membranes
 
* 본 제품군은 Edman Sequencing 의 분석과정에 적합하게 formulation 된 특성이 있으며 일반적 화학적 물리적 내성이 강한 특징이 있다. 참고로 일반 blotting PVDF membrane 의 경우에도 분석 시료 준비해도 분석이 가능하다.
 
B. memrbrane pore size 와 단백질 분자량과의 상관관계
 > 20kDa 인 경우 0.45um < 20kDa 의 분자량이 target protein 인 경우 0.2um
그리고 5kDa 미만의 경우 0.1um pore size 를 사용하는 것을 권장한다.
 
C. Membrane 유형별 특성
 
Nitrocellulose membrane 보다 PVDF membrane 을 사용해야 하는 이유 중 가장 큰 이유는
물리, 화학적 안정성이 가장 크다. 특히 NC membrane 의 경우 ethyl acetate, MeOH, 1-chlorobutane
등과 같은 용매에 쉽게 용해되는 성질이 있다. 따라서 protein support 로서는 적당하지 않다.
 
그 다음 protein transfer 효율인데,
western blotting 인 경우 항체의 검출 감도와 형광 물질에 대한 안정성으로
NC membrane 을 사용을 더 권장한다. (반면, 단백질의 결합력이 PVDF membrane 에 비하여
상대적으로 약하므로 strip 을 하는 경우에 transfer protein 이 쉽게 wash-out 되어 버린다.)
 
반면, protein transfer 효율이 높은 PVDF membrane 의 경우 반복적인 strip 에도 transfer protein
이 안정하게 고정이 되어 있다.
 
또한, membrane 의 사용 시 NC membrane 의 경우 activation 의 별도의 과정이 필요 없이
바로 사용이 가능하나, PVDF membrane 의 경우 MeOH 에서 1분 정도의 activation 절차 이후
사용해야 membrane 으로 단백질이 정상적인 transfer 가 가능하다
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